动物进出实验动物屏障环境操作规范

3、主体内容
3.1    动物流向的简图
3.1.1 动物传入：外环境的动物包装箱→传递窗→动物接收室→洁净走廊→动物饲养室；
3.1.2 动物传出：动物饲养室内装箱→污物走廊→缓冲区→外环境。
3.2    动物进入
3.2.1 准备：实验人员填写《动物购买及使用申请表》，动物中心统一采购实验动物；
3.2.2 传递：由动物设施管理人员接收，流程参照“实验动物接收、验收及检疫的标准操作规程”；
3.2.3 动物接收、验收步骤：由兽医及课题组动物实验负责人负责。流程参照“实验动物接收、验收及检疫的标准操作规程”；
3.2.4 注意事项：严禁私带动物进入动物屏障设施。
3.3    动物传出
3.3.1 动物实验负责人在实验结束后，自行处理，包装好，防止血水流出，包装袋上贴好标签，尸体放入指定冰柜，并进行登记，等待专业单位“无害化处理”；
3.3.2 将动物放入空笼盒内，从污物走廊带出屏障，使用 CO2 安乐死设备进行安乐死，包装袋上贴好标签，放入指定冰柜，并进行登记，等待专业单位“无害化处理”。

一、接收

1、动物引进屏障区域当天，课题组申请人提前与中心饲养管理人员联系，提交该批次实验动物的《笼位预定申请》原件、《动物检疫申请》原件、《动物检疫合格证明》原件或复印件、《动物质量合格证》原件或复印件，以及动物生产单位的《实验动物生产许可证》复印件以及最近季度哨兵鼠病原微生物《检测报告》复印件。

2、工作人员核实材料无误后，再检查SPF级运输包装箱的完整性。运输盒必须保证符合SPF级动物运输标准，且完整、无破损、浸泡水等异常情况。若笼盒破损或泡水后动物与环境空气间失去了屏障保护，直接与未经过滤的空气接触或污水渗入，不符合SPF级动物运输要求的，拍照拒收。

3、确保包装箱无破损后，工作人员对SPF运输盒进行外表消毒。用0.5%过氧乙酸对笼盒外表面（6个面）进行喷雾消毒，然后将笼盒放入传递窗中关闭窗门，打开紫外灯消毒15分钟。紫外照射结束后，按压通风按钮，将传递窗中产生的臭氧吹散。打开传递窗另一侧的门，取出笼盒，然后关闭窗门。传递窗两侧的门不得同时打开，保证检疫室安全。

4、工作人员将笼盒小心打开，由工作人员和检疫人员对动物进行临床检查。包括健康状况正常与否，并核对动物的性别、数量和规格是否与订单符合，不符合的动物现场告知课题组联系人。无异常则由工作人员进行分笼，放入新准备好垫料、饲料和饮水的笼中饲养，小鼠每笼不多于5只，大鼠每笼不多于3只。

5、以下情况之一者，中心将拒绝接收该批次动物引进：①材料不全者；②包装盒破损；③外伤、疑似患病或死亡的动物；④其它不适合进入屏障环境饲养的动物等。

二、检疫

6、临床检查的具体内容。临床检查采用视诊和触诊相结合的方法，通过观察实验动物的临床表现，判定该批实验动物对新环境的适应性及身体健康状况。具体操作如下：

将动物的饲养盒放在检疫台上，先对整群动物进行观察，检查动物的精神状况、外貌、营养、立卧姿势、呼吸等情况。视诊时，若发现动物精神及食欲出现沉默、倦怠、动作不活泼、食欲不振、拒食；营养上表现消瘦、肥胖；体态姿势出现异常，行走与站立困难，步态麻痹、运动失调，跛行；呼吸上出现呼吸困难，咳嗽；体表出现毛少、脱毛、外伤或有痂皮形成；出现鼻涕、恶露；眼睛失明或有分泌物；腹泻、呕吐；动物习惯上出现异食癖等现象时，通常要引起高度警惕，须从运输笼中拿出放在空饲养盒中，进一步检查。体表触诊则一般进行实验动物脉搏的检查，接触动物的皮肤、被毛、淋巴结等体表变化；体内触诊包括对口腔内黏膜、牙齿、牙周组织、舌等口腔检查和触感（弹性、硬度、肿胀、疼痛等）检查。

饲养管理人员密切观察动物的精神、运动、皮肤、被毛、饮食、粪尿等基本情况，并及时进行异常情况的记录和反馈。

7、微生物检测。课题组需要随群提供至少该批次动物的5-10%数量大小鼠作为检疫用鼠，用于采样送检用；如没有提供检疫用鼠，检疫人员将从鼠群中随机挑选2只采样检疫（采样可能导致动物应激或死亡）。检疫人员采样后，填写针对大小鼠的《检测委托书》，送第三方机构检测国标规定的病原微生物。采血前先用异氟烷麻醉大小鼠，大小鼠一般采用眼眶下静脉丛采血，采血量至少300微升，采集的血液3000rpm离心10分钟，收集上清放入1.5毫升离心管中保存。

根据国标要求进行的微生物检测项目有，小鼠17项，大鼠18项，要求阴性。

其中细菌检测项目包括：沙门菌、支原体、鼠棒状杆菌、泰泽病原体、嗜肺巴斯德杆菌、肺炎克雷伯杆菌、绿脓杆菌、支气管鲍特杆菌（大鼠）；免疫缺陷动物还要检测牛棒状杆菌。

病毒检测项目包括：汉坦病毒（大鼠）、小鼠肝炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型、小鼠细小病毒（小鼠）、大鼠细小病毒RV株和H-1株（大鼠）；免疫缺陷动物还要检测小鼠诺如病毒。

寄生虫检测项目包括：体外寄生虫（节肢动物）、弓形虫、鞭毛虫、纤毛虫、全部蠕虫。

8、国内异地购进动物的检疫期为5-7天，国外引进动物的检疫期为14天。饲养人员每天观察并根据异常情况，填写《验动物中心动物异常情况记录表》。待微生物检测报告出来后，检疫人员根据临床观察和微生物检疫结果决定大小鼠是否转入饲养间。检疫不合格的大小鼠退出检疫间，检疫合格的大小鼠则根据笼位预定信息，转入对应饲养间。大小鼠转出检疫间后，饲养人员对检疫间进行全面消杀并空置至少7天以上。

9、接收时或检疫隔离期间发现疑似患病动物，饲养管理人员立即向兽医、检疫人员及管理负责人反馈，立即隔离患病动物和疑似患病动物，并在兽医师的指导下妥善处置。

10、中心将根据第三方检测结果，建立适用于动物中心使用的实验动物供货商黑白名单，并根据实际运行情况不定期再抽检白名单供货商的动物质量，确保质量过关。

11、课题组实验动物来自白名单（免疫正常、免疫缺陷动物供货商的白名单不一样，请提前询问），由中心管理人员决策是否对该批次动物免第三方检测，仍需检疫间观察7天，无异常方可转入正式饲养，有异常则退出。

12、课题组实验动物（免疫正常、免疫缺陷）来自非白名单，中心将按照检疫要求对该批次动物抽样送第三方检测，同时检疫间观察7天，临床观察和微生物检测结果都正常方可转入正式饲养，任何一项有异常则退出。（仅供参考）